臍帯間葉系幹細胞の処理における一般的な問題と解決策!
数ブラウズ：0 著者：サイトエディタ 公開された： 2025-11-27 起源：パワード
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間葉系幹細胞 (MSC) に は幅広いソースがあります。骨髄由来の MSC は最も広範囲に研究されていますが、その増殖能力は比較的弱く、ドナーの年齢とともに減少します。脂肪由来間葉系幹細胞は入手が容易で、骨髄由来のものよりも優れた免疫調節能力を持ち、初期段階で強力な増殖能力を示します。 「ゼロ年齢細胞」の特徴と低い免疫原性で知られる臍帯由来MSCは非常に人気があり、研究のホットスポットとなっている。したがって、臨床変換および応用では、臍帯由来および脂肪由来のMSCの使用がより一般的に行われます。
MSC の in vitro 培養における「最初のステップ」としてのサンプル処理は、その後の実験の成功または失敗を直接決定します。このガイドでは、臍帯サンプルの選択と処理における一般的な問題に主に焦点を当て、培養前にスムーズに開始できるようにします。
Q: 臍帯由来 MSC を培養するための適格な臍帯を選択するにはどうすればよいですか?
臍帯の選択は、臍帯 MSC の一次分離実験をスムーズに行うための重要なリンクでもあります。
高品質のへその緒の条件:
へその緒の保管および輸送条件:
へその緒は保存液に入れて4℃で保存してください。乾燥した状態で輸送されると、浮腫を起こしやすく、組織からの細胞の移動が遅くなります。
へその緒は採取後 48 時間以内に使用する必要があります。 72 時間以上保存された臍帯からは細胞が遊出しない可能性が一定の確率で存在します。
臍帯は 1% の抗生物質を含む保存液に保存する必要があります。そうしないと、汚染のリスクが高くなります。
Q: へその緒を選ぶ際に注意すべき点は何ですか?
臍帯の浮腫および透明または半透明のウォートンゼリーにより、組織ブロックからの細胞の移動が少なく、遅くなる可能性があります。
へその緒がねじれたり、萎縮したりすると、組織ブロックからの細胞の移動が遅くなる可能性があります。
臍帯の重度のうっ血により、組織ブロックからの細胞の移動が遅くなり、培養皿内に多数の赤血球が見られることがあります。
へその緒の切断や分娩室からの取り出しの際に不適切な操作を行うと、汚染が生じる可能性があります。
推奨される解決策:
浮腫や重度のうっ血のないふっくらとした臍帯を選択し、浮腫、萎縮、またはうっ血している小さな部分を切り取ります。研究室で頻繁に汚染が発生しない場合は、1% 二重抗体 (ペニシリンとストレプトマイシン) または 25mg/L ゲンタマイシンを含む生理食塩水で臍帯を 3 ～ 5 回洗浄できます。汚染が頻繁に検出される場合は、最初に臍帯を 75% エタノールで 40 ～ 60 秒間洗浄し、次に 1% 二重抗体を含む大量の生理食塩水で 10 ～ 20 回洗浄します。
Q: 臍帯間葉系幹細胞は何に分類されますか?
臍帯は胎児と胎盤を繋ぐ紐状の組織で、母親と胎児の間でのガス交換、栄養供給、代謝産物の排泄を担っています。その基本的な特徴は次のとおりです。
発育時間: ヒト胚形成後 4 ～ 8 週間で発育が始まります。
形態学的データ：平均長さ55cm、直径14.42mm、重さ40g。
構造構成：表面は羊膜（オフホワイト）で覆われており、内部には臍静脈1本と臍動脈2本が入っています。血管の周囲には無色半透明のコロイド組織、ウォートンゼリー (WJ) があり、その主な機能は臍の血管を保護することです。
間葉系幹細胞は、臍帯の 4 つの異なる区画から取得でき、その供給源に基づいて次の 4 つのタイプに分類されます: ウォートンゼリー間葉系幹細胞 (WJ-MSC)、血管周囲間葉系幹細胞 (PV-MSC)、羊膜下間葉系幹細胞 (SA-MSC)、および羊膜間葉系幹細胞 (AM-MSC)。これら 4 つのコンパートメントからの間葉系幹細胞は、異なる分離方法で分離されます。
Q: ウォートンのゼリー間葉系幹細胞 (WJ-MSC) の利点は何ですか?
臍帯の他の部分から採取した間葉系幹細胞と比較して、WJ-MSC は増殖能力、分化能、安全性などの点で優れています。
量と単離の利点: ウォートンゼリーは臍帯の大部分を占め、最大の表面積と体積を持ち、他の領域よりもはるかに多くの星状間葉系幹細胞を含んでいます。その分離には複雑な酵素処理が必要なく、短期間の培養で十分な細胞が得られるため、生存率と純度が確保されるだけでなく、培養中の微生物汚染のリスクも軽減されます。
より強力な分化能: WJ-MSC は、より顕著な骨形成および軟骨形成分化能力、より高い生存率と増殖率、さらにより強力な増殖および再生能力を備えています。
高い安全性：免疫原性が低く、MHC-Ⅱを発現しません。非腫瘍原性があり、抗炎症特性を持っています。
Q: へその緒からウォートンゼリーを分離するにはどうすればよいですか?
医療用はさみを使用して、臍帯を 2 cm の組織セグメントに切り、臍静脈に沿って各セグメントを切開します。組織鉗子を使用して、臍静脈の内膜、外皮、および 2 本の臍動脈を剥がし、ウォートン ゼリーを完全に露出させます。
ウォートンゼリーは 3 本の血管と外側の表皮を完全に取り除く必要があります。完全に剥がさないと、上皮様異種細胞が外に遊走し、MSCの増殖スペースを占有し、採取される細胞数が減少します。これらの細胞は穏やかな酵素では消化されにくく、継代によって除去できます。処理された臍帯は、その後の移植法による接種に使用できます。
Q: 埋め込み法で接種する際の注意点は何ですか？
ブロックに切り分ける
分離したウォートンゼリーを約3mmの小片に切ります。組織片が小さすぎると、壁に付着することが難しくなり、細胞の遊走がまったくないか、少なすぎます。組織片が大きすぎる場合、または完全に切断されていない場合も、細胞は遊走しません。組織片をハサミで完全に切り刻んでしまうと初代細胞培養に失敗する可能性があります。
接種
組織片は培養皿/フラスコの大きさに応じて適切な培地に植菌し、適量の培地を添加する必要があります。培地が少なすぎると細胞が組織片から遊走できなくなりますが、培地が多すぎると組織片が浮いて細胞は外に遊走できなくなります。
接種後は、組織片をできるだけ動かさないようにする必要があります。最初の 7 日間は、培地の補充を除いて、インキュベーター内で完全に静置することが最善です。頻繁に動かすと組織片が浮遊し、細胞が外に移動できなくなります。
